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商品コード:
PYRO

パイロシーケンスDNAメチレーション解析

関連カテゴリ:
受託解析サービス > DNAメチル化解析
パイロシーケンス法DNAメチレーション解析
ターゲット遺伝子のCpG領域DNAメチル化状態を検出し、CpGサイトを個々に定量/比率解析

パイロシーケンス解析サービスについて

ターゲット遺伝子のCpG領域DNAメチル化状態を検出し、CpGサイトを個々に定量/比率解析

■ 概 要
DNA抽出からデータ解析までのトータルサポート
遺伝子情報とサンプルをご提供頂くだけで、DNAを抽出からプライマー設計、Bisulfite処理、シーケンス解析まで一連の
サービス/サポートを提供致します

パイロシーケンス法による高精度/信頼性高い結果
ターゲット遺伝子のCpG領域DNAメチル化状態を検出して、CpGサイトを個別に定量/比率解析します

他手法データのバリデーション
従来法のMSP、COBRA、MethyLight及びマイクロアレイなどのデータ等の検証を行い信頼性の高い結果を得ることができます

■ サービス内容
ゲノムDNAまたは細胞/組織/パラフィンサンプルを送付いただき、DNA抽出/精製(細胞/組織/パラフィンサンプルの場合)、
DNA品質チェック、ターゲットCpGサイト検索、プライマー設計/合成、Bisulfite処理、PCR、リアルタイムシーケンス、
解析を行います



 

パイロシーケンス法解析


メチル化定量解析のためのパイロシークエンス法
パイロシーケンス法は個々のCpGサイトでメチル化頻度の定量を高い再現性で行ないます。またパイロシーケンス法は、複数の連続する部位或いは個々の部位で、メチル化レベルのわずかな差異でさえも正確な検出と定量を実現します。この高解像度解析により、通常の方法ではいつも可能とは限らない、バックグランドのメチル化から生理的な相関をもつメチル化を判別します。さらに、解析結果の配列情報がバイサルファイト変換の内在コントロールになること、予想されるメチル化レベルと結果を比較可能などの特長を有しています。

バイサルファイト変換-PCRによるDNA配列
パイロシークエンス法によりDNA配列のメチル化状態を解析するためには、まずDNAをsodium bisulfite で処理します。これにより非メチル化シトシン残基はウラシルに変換され、メチル化シトシンはそのままです。 この結果、判別可能な2つの異なる配列が得られます。
バイサルファイト変換とPCR 後の配列 

DNA 変換前の配列 バイサルファイト変換後 PCR増幅後
非メチル化DNA  A-C-G-T-C-G-T-C-A A-U-G-T-U-G-T-U-A A-T-G-T-T-G-T-T-A
メチル化DNA  A-C-G-T-C-G-T-C-A  A-C-G-T-C-G-T-U-A   A-C-G-T-C-G-T-T-A
                                  
メチル化パターンの多面的な解析
Sangerシーケンシング法とは異なり、パイロシーケンス法で得られるピークの高さは解析した各CpGサイトでのシトシンとチミンの割合を示すので、メチル化DNAの比率がわかります。ターゲット箇所に限定されないフレキシブルなアッセイデザインが可能です。 CpGサイトは個々に解析されるので、これにより、位置に特異的なメチル化の詳細情報をもつDNA配列のメチル化パターンの解析が可能です。




 

実験・解析ワークフロー

ゲノムDNAまたは細胞/組織/パラフィンサンプルを送付いただき、DNA抽出/精製(細胞/組織/パラフィンサンプルの場合)、
DNA品質チェック、ターゲットCpGサイト検索、プライマー設計/合成、Bisulfite処理、PCR、リアルタイムシーケンス、
解析を行います
1. 解析領域(CpGサイト)検索 ⇒ 2. PCR & Sequence Primer設計/合成 ⇒ 3. 実験/解析


1. 解析領域(CpGサイト)検索

ターゲット遺伝子は決まっているが、解析領域が未定の場合、CpGサイト解析領域の検索を行います。
解析候補CpGサイト領域を報告致します。

ターゲット遺伝子の解析領域、CpGサイトを検索して、解析領域内
のCpGサイト対してPCR 及びSequence primerを設計します


2. PCR & Sequence Primer設計/合成
お客様指定のCpGサイト領域または検索結果から指定頂いたCpGサイト領域にて、PCR primerおよび
Sequence primerを設計


3. 実験/解析

 

価格・納期

納期:サンプル受領後、約4週間