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マルチプレックスサイトカイン/ケモカイン解析
マルチプレックス解析について
100種類の異なる蛍光染色したMicrosphereを各ビーズごとに特定のタンパク質(抗体)をつけた後、
試料と反応させて、特定のビーズと試料が反応した結果を同時に測定する分析システムです。
1つの試料を同時に最大100種類の分析物質の測定結果を得ることができ、分析試料、時間、
労力、コスト削減効果を得ることができます。(アッセイ・解析提携:KOMA BIOTECH)
【測定原理】
1.サンプル調整
細胞培養上清サンプル調整
-細胞培養液を回収後、遠心機により固形物を除去し、チューブに分注して直ぐに-20℃以下で凍結保存
-使用したメディウムを1mL程度、サンプルと同時にお送り下さい
血清サンプル調整
-血清分離用チューブで回収するか、血液を30分程おいて凝固させ、1000×gで15分遠心後、
チューブに分注して直ぐに -20℃以下で凍結保存
-溶血していないものをご用意ください
血漿サンプル調整
-採血後30分以内にEDTA処理した血液を1000×gで15分遠心後、チューブに分注して直ぐに-20℃以下で凍結保存
-へパリンでは処理しないで下さい(サンプルの活性に影響を与えます)
組織/細胞ライセートサンプル調整
-RIPAバッファー等を使用して組織・細胞を溶解します
-遠心機で固形物を除去し、チューブに分注して直ぐに -20℃以下で冷凍保存
※注意事項
● ご送付頂くサンプルは、できるだけ新鮮なものをご用意下さい
● サンプルは採取後、直ぐに凍結してください
● 凍結・融解を繰り返したサンプルは活性に影響を与えるため避けてください
2.必要サンプル量
n=1(シングル): 50ul/サンプル
n=2( デュプリケート): 100ul/サンプル
n=3(トリプリケート): 150ul/サンプル
【マルチプレックス解析オーダー】
1. アナライト選択
目的の生物種のパネルからアナライトを選択します。アナライト選択の際は下記の点にご注意ください
● アナライトは磁気ビーズまたはポリスチレンビーズのどちらか一方を選択してください
● 同じビーズ#は同一ウェル及び同一プレートでは測定できません
● 希釈係数の違うアナライトは同一ウェル及び同一プレートでは測定できません
● 交差反応するアナライトは同一ウェル及び同一プレートでは測定できません
※選択されたアナナイトの交差反応についてはお問合せ下さい
2. 測定サンプル数
測定には96ウェルプレートを使用し、ブランク、スタンダードに14ウェルを使用します
測定サンプル数は最大82サンプルになります
3. 測定サンプル量
必要サンプル量:50ul/サンプル(n=1の場合)
デュプリケート(n=2)の場合、100ul/サンプル
トリプリケート(n=3)の場合、150ul/サンプル
4. サンプル発送
解析サンプルは必要量をスクリューキャップ付チューブに入れて、十分なドライアイスと一緒に梱包して発送して下さい。
5. 解析データ
解析レポート、各サンプルのサイトカイン定量解析データおよび検量線データをCDにて納入致します。
Ratサイトカイン/ケモカイン アナライト
アナライト選択において、下記の点にご注意ください
●アナライトは磁気ビーズまたはポリスチレンビーズのどちらか一方を選択してください
●同じビーズ#は同一ウェル及び同一プレートでは測定できません
●希釈係数の違うアナライトは同一ウェル及び同一プレートでは測定できません
●交差反応するアナライトは同一ウェル及び同一プレートでは測定できません
※選択されたアナナイトの交差反応についてはお問合せ下さい
| No. | アナライト | 磁気 ビース# |
ポリスチレン ビーズ# |
希釈係数 細胞上清 |
希釈係数 血清/血漿 |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | CXCL2/CINC-3 | 13 | 54 | None | 1:2 |
| 2 | CXCL3/CINC-2 | 12 | 53 | None | 1:2 |
| 3 | GM-CSF | 14 | 17 | None | 1:2 |
| 4 | ICAM-1 | 15 | 75 | None | 1:2 |
| 5 | INF-gamma | 18 | 80 | None | 1:2 |
| 6 | IL-1 alpha | 19 | 6 | None | 1:2 |
| 7 | IL-1 beta | 20 | 21 | None | 1:2 |
| 8 | IL-2 | 21 | 61 | None | 1:2 |
| 9 | IL-4 | 22 | 19 | None | 1:2 |
| 10 | IL-6 | 25 | 10 | None | 1:2 |
| 11 | IL-10 | 26 | 26 | None | 1:2 |
| 12 | IL-13 | 27 | 74 | None | 1:2 |
| 13 | IL=18 | 28 | 18 | None | 1:2 |
| 14 | L-Selectin | 29 | 34 | None | 1:2 |
| 15 | TIMP-1 | 30 | 33 | None | 1:2 |
| 16 | TNF-alpha | 33 | 4 | None | 1:2 |
| 17 | VEGF | 34 | 58 | None | 1:2 |